Pomiar hamowania transporterów wychwytu zwrotnego monoamin przez nowe substancje psychoaktywne (NPS) w czasie rzeczywistym za pomocą wysokoprzepustowego testu opartego na fluorescencji.

Entaktogeny/Stymulanty/Halucynogeny

• Test oparty na fluorescencji jest nieskomplikowany, nie wymaga określonych urządzeń i pozwala na pomiary kinetyczne w warunkach fizjologicznych. 
• Powszechnie stosowane nielegalne narkotyki i zależne od stężenia NPS hamują wychwyt monoaminy przy oczekiwanych stężeniach w mózgu. 
• Test oparty na fluorescencji pokazuje porównywalne wyniki w testach hDAT i hNET do radiometrycznych. 
• Test oparty na fluorescencji pokazuje różne wyniki dla fenetyloamin w hSERT w porównaniu do testów radiometrycznych. 
• Ten wysokoprzepustowy test fluorescencyjny jest dobrą alternatywą dla testów radiometrycznych do badania indukowanego lekiem hamowania transporterów wychwytu zwrotnego monoaminy.

Im mniejsze wartości, tym wiekszy wychwyt ;-)




Tabela 2. Szacowane stężenia w mózgu powszechnie stosowanych nielegalnych narkotyków, NPS i fluoksetyny w porównaniu z ich siłą hamowania transporterów monoaminy. Szacowane stężenia w mózgu obliczono na podstawie stężeń w surowicy ludzkiej i współczynników podziału mózgu (BPF) znalezionych w literaturze. Wszystkie stężenia w surowicy u ludzi uzyskano z dawek do użytku rekreacyjnego (dobrowolne spożycie, jazda pod wpływem lub przypadkowe zatrucie inne niż śmiertelne), z wyjątkiem 5-APB. Stężenie α-PVP w surowicy opiera się na stężeniach we krwi (małe czapki). BPF oparto na stężeniach szczurów (pogrubionych) lub myszy (kursywnych) w surowicy i mózgu lub wartościach krwi pośmiertnej u ludzi (podkreślonych) lub surowicy (przekreślonych) w porównaniu ze stężeniami w mózgu. Szacowane stężenia w mózgu dla 5-APB i 25B-NBOMe oparto na obserwacji, że większość BPF to > 1. Szare bloki wskazują, że IC50 wartości uzyskane za pomocą testu fluorescencyjnego nie mieszczą się w szacowanym zakresie stężeń w mózgu. Pogrubienie IC50 wartości wskazują wartości w szacowanym zakresie stężeń w mózgu.



Tabela 3. Hamowanie pobierania transportera monoaminy (IC50, μM) przez nielegalne narkotyki, NPS i fluoksetynę w porównaniu z literaturą. Wszystkie artykuły podane w tej tabeli wykorzystywały podłoża znakowane radioaktywnie. Moc hamowania pobierania określono za pomocą transfekowanych komórek HEK293 (e, g, h, i, k, l, m, o, p, q), synaptosomów mózgu szczura (a, b, f, g, j, n, kursywa), ludzkie płytki krwi (c, SERT, podkreślone), komórki glejowe C6 (c, DAT + NET, podkreślone paskami) lub komórki JAr (d, podkreślone kropkami). Prawie wszystkie badania wykorzystywały komórki w zawiesinie, z wyjątkiem b, d, g, h, k i c, DAT + NET (pogrubienie).



Referencje dotyczące stężeń w surowicy: a Javaid i in., 1978; b Stożek, 1995; c Jeffcoat i in., 1989; d Isenschmid i in., 1992; e Jenkins i in., 2002; f Lee i in., 2000; g Angrist i in., 1987; h Röhrich i in., 2012; ja Eiden i in., 2013; j Wright and Harris, 2016; k de la Torre i in., 2000; l Vevelstad i in., 2012; m Elliot and Evans, 2014; n Adamowicz i in., 2014; o Adamowicz i in., 2016; p Ho i in., 2013; q Polkis i in., 2014a; r Laskowski i in., 2015; s Polkis i in., 2013; t Wood i in., 2012; ty Shields i in., 2012; v Orsulak i in., 1988; w Rambourg Schepens, 1996, x Johansen i Hansen, 2012, ty Holmgren i in., 2008. 

Referencje do obliczeń BPF: 1 Brajkovic i in., 2016; 2) Bystrowska i in., 2012; 3 Rivière i in., 2000; 4 White i in., 2014; 5 Hendrickson i in., 2006; 6 Sykutera i in., 2015; 7 Hasegawa i in., 2014; 8 Mueller i in., 2009; 9 Pálenícek i in., 2011; 10 Rohanová i in., 2008; 11 Polkis i in., 2014b; 12 Horsley i in., 2016; 13 Karson i in., 1993; 14 Holladay i in., 1998; 15 Shiue i in., 1993.

https://www.sciencedirect.com/science/ar...3317301261